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培训资料
Lonza Amaxa 细胞核转染系统(Nucleofector)介绍
作者:Morey 发布时间:2017-03-13 点击次数:1684

  工作原理

  Amaxa®Nucleofector®技术是 Lonza(原Amaxa)公司的专利创新技术,它综合应用传统的电穿孔技术及细胞特异性细胞核转染液,通过调整优化的电转参数(内存转染程序),直接把外源基因导入原代细胞及细胞系的细胞浆和细胞核中。它不同于传统的电穿孔仪,因为它可以把外源基因直接导入核中,而且细胞存活率远远高于电穿孔仪。

  Nucleofector 技术是独一无二的,因为它可以直接将DNA转染到细胞核内,因此实现了因受到细胞分裂限制而一直困扰人们的原代细胞的高效率转染。在 Nucleofector核酸转染仪的帮助下,您可以在肿瘤研究、免疫学、组织工程学及心血管疾病研究领域中轻而易举地获得大于90%的高效率基因转染率。Nucleofector 核酸转染技术特别适用于转染原代细胞和难以转染的细胞系,如T细胞及PC-12细胞系等。

  Nucleofector试剂盒包含两个溶液:Nucleofector溶液和添加剂。两者都是针对每个细胞类型来特异开发的。它们在核转染过程中提供了细胞友好的环境,支持DNA直接到达细胞核。Nucleofector溶液只与Nucleofector装置共同使用时,才能发挥作用。

  产品优势

  1.不依赖细胞的有丝分裂,适用于悬浮细胞、原代细胞等难转染细胞。

  2. 高转染效率,直接将外源基因转入核内。

  在某些细胞中Nucleofector的转染效率可以达到90%,与病毒感染同样有效。Nucleofector直接将DNA运送到细胞核中,因此,基因表达就可以立即开始,数小时内就可以完成转染和分析的全过程,对于细胞系来说2-6小时就可以分析,对于原代细胞则需要4-16小时。

  3.可转染DNA、RNA或siRNA。

  4.操作简单方便,Nucleofector转染技术操作不到1小时就能完成。

  5.最广泛细胞类型,全球共享的细胞转染数据库不断扩大。目前已有1200余种细胞系高效转染,130余种原代细胞成功转染。

  6.维持细胞生理功能。

  Nucleofector 细胞核转染技术操作步骤

  整个操作过程只需四步,非常简单、高效。

  第1步:处理细胞,精确计数

  第2步:混合DNA、转染液,重悬细胞,加入转染杯

  第3步:将转染杯放入转染仪,按键选择相应程序,按"start"键开始转染,10秒钟左右

  第4步:取出细胞继续培养

  


  外源基因直接导入核内。Normal human dermal fibroblasts –neonatal were nucleofected with 2.5 μg TMR-labeled plasmid DNA encoding eGFP. Fixation of cells was performed after 2 hours with 3.5 % PFA. TMR label is shown in (A), GFP fluorescence in (B), DAPI nuclear staining in (C) and a merge of all three fluorescent labels in (D).

  


  


  最广泛细胞类型的高效转染


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