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默瑞新闻
新一代等温扩增检测技术RPA开发者——TwistDx公司来
作者:Morey 发布时间:2017-11-01 点击次数:5835

一个月内,顶级学术期刊连发两篇顶级论文!上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作!这次,他在一月内,分别在Nature》、《Science连发两篇论文!他CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(aM10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的SHERLOCK技术。而这其中,RPA起到了不小的作用。

那么,什么是RPA呢?

RPA,即重组酶聚合酶扩增技术,是在由多种酶和蛋白的参与下,在恒温条件下实现核酸指数扩增的技术,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。

RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。

RPA的反应原理

RPA的反应过程,首先是重组酶与引物结合,形成蛋白-DNA复合物。接着在dsDNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。而被替换的DNA链与SSB单链DNA结合蛋白结合,防止进一步被替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

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RPA与相关技术的比较

PCR实验相比,RPA实验能在恒定温度下进行全程实验,没有复杂的操作,对仪器及人员的要求不高,适合基层或现场快速诊断。

QQ截图20171101131303.jpg 

而另一种新兴技术,LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”,由于其简便的操作,也被视为PCR技术强有力的竞争者。在此,让我们对比下LAMPRPA两种试剂盒进行的实验:


LAMP(环介导等温扩增)试剂盒

RPA试剂盒

主要组分

链置换DNA聚合酶

重组酶;单链结合蛋白;链置换DNA聚合酶

最适反应温度

60-65

37-40

推荐反应时间

40min左右

20min左右

引物数

2

1

保存形式

液体

冻干粉;液体

检测方式

荧光目视;比浊法实时浊度仪

电泳;试纸条;荧光定量

扩增产物可否用于下游应用

可否Multiplex/多重反应

缺点

气溶胶,易产生假阳性

价格高 

上月,RPA 技术的开发公司——英国TwistDx Inc商务总监Tony Hill来到了我公司,为我们深入介绍了RPA技术,及TwistDx的各类产品。

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Tony还与我公司的技术人员一同拜访上海市农业科学院及上海阅尔基因技术有限公司,分别向赵凯研究员及其研究生,以及阅尔基因的研究人员介绍了RPA 技术,解答他们在使用中遇到的问题。

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 英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增,开发的重组酶聚合酶扩增专利技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。

TwistDx以此技术为基础生产的核酸扩增类产品,能在恒定且较低的温度下,仅用10~20分钟,进行单分子核酸检测。这一技术对环境、硬件设施的要求很低,对于生物防护、水体检验、食品检验、医疗诊断、微流体、兽医等方面都有良好的应用。

RPA扩增的各种体系试剂盒中,含有DNARNA扩增所需的所有试剂,研究者只要准备好引物和模板就行了。扩增结果可以分别通过凝胶电泳检测、荧光定量检测或试纸条检测,产物纯化后可用于下游研究。

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默瑞(上海)生物科技有限公司与英国TwistDx公司达成战略合作,负责RPA技术及相关产品在中国大陆地区的推广。

默瑞(上海)生物科技有限公司Morey Biosciences ,Inc .简称默瑞生物)成立于2016722日,于81日正式运营,其前身是一家具有15年代理销售生命科学仪器的专业公司。提供一流的服务,代理一流的产品,成就一流的公司。默瑞生物以此为经营理念。默瑞拥有两个产品部,仪器部和试剂部。

仪器部主要代理产品有:Leica显微系统,Merck Millipore实验室纯水超纯水仪及配套耗材,Roche实时定量PCR仪、核酸纯化,Beckman流式细胞仪、离心机,IKA桌面小仪器,Lonza 细胞核转染系统,Miele清洗机,Tecan酶标仪、液体工作站等。

试剂部主要代理产品有: TwistDx恒温扩增试剂盒,Echelon酯类研究试剂,Jackson ImmunoResearch抗体,MTI-GlobalStem细胞转染试剂,ChromoTek标签抗体, Horizon Discovery测序标准品和细胞,Enzymatics二代测序酶, Biomatik公司Elisa试剂盒,BiosPacific抗体抗原,bioWORLD植物生长剂,Nanocs PEG修饰剂,Spectrumlabs透析袋,Brighter Ideas荧光蛋白,Lumiprobe荧光染料,Polysciences微球,Emfret心血管疾病研究抗体, Iduron糖胺聚糖产品,JenaBioscience分子试剂,eENZYME病毒研究工具等。

想更深入地了解这些TwistDx产品应用可以点击以下链接:

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